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SYBR Green I 
 
 

货号

名  称

规格

EP1601-1

SYBR Green I(电泳染色用)

100ul/

EP1601-2

500ul/

EP1602

SYBR Green I(荧光定量PCR)

500ul/

 
SYBR Green I核酸染料(电泳用)
        SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳,脉冲电场凝胶电泳,和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。另外,SYBR Green I 与EB相比,诱变能力大大降低。
 
 
SYBR Green I 核酸染料特点
◆  高灵敏:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。
◆  信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
◆  操作简单:无须脱色或冲洗。
◆  适用范围广:可适用于多种电泳分析。
◆  使用方便:不影响其它修饰酶作用。
◆  经济:价格比银染便宜。
 
 
电泳用SYBR Green I 使用方法
SYBR Green I预染方法
◆   该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
◆   工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍,即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
◆   制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
◆   样品染色:向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
◆   DNA Marker染色:将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
◆   上样、电泳:按常规操作。

SYBR Green I后染方法
◆   按照常规方法进行电泳。
◆   用PH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000:1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液,混匀,制成染色溶液。
◆   将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
◆   用蓝盾TM观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测。
 
SYBR Green I使用注意事项
◆  在”SYBR GreenⅠ预染色方法”中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。
◆  在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。
◆  如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%- 0.3% 的SDS。
◆ 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。
◆  SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
 
SYBR Green I荧光定量PCR
      SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800-1000倍。在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。


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