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如何从酵母快速提取总RNA
 
摘要: 总RNA提取中,除了某些富含多糖多酚的植物组织以及土壤较为困难外,酵母由于其复杂的细胞壁结构也给实验人员造成不小的麻烦。
众所周知,总RNA提取的纯度与完整性,对于许多分子生物学实验的进展都至关重要,比如,Northern 印迹及杂交分析,cDNA文库构建等,这些实验的成败在很大程度上取决于总RNA的提取质量。对于RNA含量丰富,易于破碎的样品来说,高质量RNA的提取并非难事,但对于破壁较为困难的材料——酵母来说,就并非人人都能很好地提取出高质量的RNA。
酵母菌是一些单细胞真菌,目前已知的酵母菌有1000多种。酵母菌有三类:子囊菌、担子菌和“假酵母”。目前已知大部分酵母都属于子囊菌门,这是一种产生孢子的菌。酵母菌主要生长在潮湿或液态环境,有些也会生存在生物体内。目前,尤其是食品行业中,酵母菌显得异常兴盛,比如啤酒发酵,酸奶污染等都与酵母息息相关。所以,科研人员对酵母菌的研究工作也是越来越热。但是,在进行更深层次研究时,却都会碰到一个棘手的问题——高质量酵母总RNA的获取。下面分别是酵母菌群和形态图。
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酵母菌群图
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酵母菌形态图
学过微生物学的都知道,酵母是一种具有特殊细胞壁结构的真菌,其细胞壁是由内层葡聚糖的细纤维,覆盖在细纤维上面的中间层糖蛋白和外层甘露聚糖,由1,6一磷酸二酯键共价连接,形成复杂的,紧密交联的网状结构。与细菌细胞壁一样,酵母细胞壁比其它种类的细胞壁都相对会厚,并且交联又紧密,所以这就给RNA的提取纯化工作带来很大困难。
目前,市场中酵母RNA提取的产品均很难对酵母细胞壁进行有效地破碎, TRIZOL主要成份是异硫氰酸胍和苯酚,没有有效破壁的成分,提取的酵母总RNA利用电泳分析只具有5s rRNA,很显然不完整;玻璃珠型的不是破碎不充分,得率低,就是破碎太剧烈片段断裂,很难掌控;而利用传统的苯酚法提取,要经过组织匀浆,苯酚处理而后乙醇沉淀等一些列步骤,虽然最后能得到生物活性的RNA。但步骤复杂,耗时较长且不利于多个样品同时操作,也并非理想的提取方法。后来有些公司虽然对以上方法又作出了改进,但提取效果仍不是很理想。
百泰克公司凭借多年来RNA提取方面积累的丰富经验,开发出酵母总RNA快速提取试剂盒,采用新型高效的破壁酶,这是一种含有纤维素酶、果胶酶、甘露糖酶、蔗糖酶和蛋白酶等几十种具有生物活性的混合酶。酵母细胞按照产品操作处理后,破壁率可达90%以上,其破碎效果见下图。
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A 未经破壁酶处理的酵母细胞
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B 经破壁酶处理后的酵母细胞

因此,采用此种方法处理既可以彻底避免过去超声破碎所需时间久,效果不理想以及机械破碎不稳定的弊端,同时还规范了RNA提取中的破碎标准,便于多个样品之间进行比对。以下为百泰克酵母总RNA快速提取试剂盒特点:
1 高品质的进口吸附膜 极大程度上减小了其它进口或国产吸附膜所造成的柱与柱之间吸附能力的差异,保证实验的重复性
2 独特的结合抽提液 性能稳定、纯度高,可极大程度提高结合效率,从而为RNA的得率打下良好的基础
3 离心柱型 简便快捷,不需要再采用传统乙醇沉淀,简化操作步骤,提高实验效率。同时也可避免提取物过渡干燥不易溶解的问题
4 新型高效破壁酶 可以将酵母细胞壁有效破除,不会造成机械破壁中的RNA损伤,从而为有效地结合抽提打下良好的基础。