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植物材料直接PCR技术
 
高通量植物(转)基因检测的利器---植物材料直接PCR技术

摘要: 北京百泰克生物技术有限公司暨推出通用植物总RNA提取试剂盒(RP3301)成功解决了各种难提植物RNA的问题后,新近又针对高通量植物DNA的提取扩增推出了最新产品——植物直接PCR试剂盒(PR7501),该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨,也不需要钢珠破碎,更不借助任何特殊的仪器设备,方法及其方便快捷。

众所周知,在正向遗传学的基因定位,植物品质和品种鉴定,或者是植物有效成分检测,以及转基因检测等,都需要高通量植物的DNA提取,然后PCR检测。尤其是在基因图位克隆中,需要构建一个大的群体(少则几千株,多则上万株),然后提取DNA,PCR方法筛选性状的连锁标记(SSR,RAPD等),最后测序克隆基因。传统方法在DNA提取中,都要液氮研磨样品,然后氯仿抽提,最后再PCR。上千株系DNA的提取就需要几周的时间。一些公司进行改进,开发了相对简单些的方法,用96孔吸附板进行提取,完成整个实验也需要大约1个小时;也有些公司在96孔深孔板中加入钢珠或者其他比重大的金属小珠帮助破碎,直接裂解后取上清做PCR,能将时间缩短至半小时,但是需要借助专用的震荡器,而且钢珠的使用成本很高;也有的公司不借助钢珠,而提供小的研磨杵,在PCR管人工研磨后裂解取上清进行PCR,显然耗费的人工时间比较多,而且也容易相互污染。

以上的方法对于大规模的基因或转基因检测显然不理想,不仅时间长而且易污染!国内外很多知名的公司纷纷投入到改进新技术的研发中!北京百泰克生物技术有限公司暨推出通用植物总RNA提取试剂盒(RP3301)成功解决了各种难提植物RNA的问题后,新近又针对高通量植物DNA的提取扩增推出了最新产品——植物直接PCR试剂盒(PR7501),该试剂盒不需要液氮和研磨杵研磨,也不需要钢珠破碎,更不借助任何特殊的仪器设备,方法及其方便快捷。只需截取0.5-0.7厘米的植物叶片放入溶液L中,95℃孵浴10分钟,无需液氮研磨,然后加等体积溶液I,就可以直接进行PCR,方便快捷,是植物领域的科研工作者的最佳选择之一。植物直接PCR试剂盒的特点有:
* 在12 分钟内可以一步提取植物基因组DNA。
* 不需要酚/氯仿抽提。
* 不需要液氮对植物组织进行冰冻、机械处理、纯化或者DNA 的沉淀。
* 含PCR MIX,裂解后取4ul就可以直接PCR。
* 不需要上样缓冲液和染料。
* 提取物在4℃可以保存6周。

实例1:
1、截取1-2片0.5-0.7厘米的水稻叶片放入1.5ml 离心管中,加入100μl溶液L,确保叶片浸没在溶液中。 
2、95℃孵育10 分钟,此时DNA已释放但叶片并没有明显的消化。
3、加入100μl溶液I。Vortex混合。直接PCR。 
4、PCR反应体系配制:
PCR体系 体积
抽提物 4μl
2×PCR MIX 10μl
上游引物 1μl
下游引物 1μl
水 4 μl
总体积 20μl

5、在PCR仪上进行如下反应:
94℃ 3min
94℃ 0.5-1min
50-65 C 0.5-1min 30-35个循环
72°C 0.5-2min
72°C 10 min
6、8%聚丙烯酰胺胶电泳,银染。
1

实例2:
提取、PCR同实例1。检测用2%的琼脂糖。
2